X-Gal，β-半乳糖苷酶的顯色底物

X-Gal，5-溴-4- 氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷的產(chǎn)品性質(zhì)

上海信帆生物供應(yīng)X-Gal，5-溴-4- 氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，供應(yīng)，歡迎大家！

產(chǎn)品描述

X-Gal是β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)的顯色底物，在β-半乳糖苷酶的催化下會(huì)產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物。基于這個(gè)特點(diǎn)，當(dāng)pUC系列載體DNA以lacZ 缺欠細(xì)胞作為宿主進(jìn)行轉(zhuǎn)化時(shí)，或M13噬菌體載體DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)，如果在培養(yǎng)基中加入X-Gal和IPTG，由于β–半乳糖苷酶的α–互補(bǔ)性，可以根據(jù)是否呈現(xiàn)白色而方便地挑選擇出基因重組體。

常用于β-半乳糖苷酶的原位染色檢測(cè)以及藍(lán)白斑篩選。

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。-20 ºC避光保存。

產(chǎn)品性質(zhì)

注意事項(xiàng)

1）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作；

2）含有 X-Gal 的培養(yǎng)基 4℃避光保存，須在1周內(nèi)使用。

配制儲(chǔ)存液

稱取200 mg X-Gal于15 mL 離心管，向其中加入10 mL DMF，旋渦震蕩使其充分溶解后于-20℃避光保存，正確操作下，有效期可達(dá)5-12個(gè)月，如小量頻繁使用，建議分裝成1 mL/管后避光凍存。

X-Gal，5-溴-4- 氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷的產(chǎn)品性質(zhì)

X-Gal，β-半乳糖苷酶的顯色底物

藍(lán)白斑篩選

1. X-Gal、IPTG 加入瓊脂培養(yǎng)基溶液

1）高壓滅菌已加瓊脂的培養(yǎng)基，并冷卻到50℃左右。

2）每毫升培養(yǎng)基內(nèi)加入10 μL20 mg/mL X-gal 溶液、10 μL 0.1 M的IPTG（使其終濃度達(dá)到1 mM）；

3）加入適量抗生素；

4）混勻后按照平板大小倒入適量培養(yǎng)基，待培養(yǎng)基冷卻至室溫后，接種細(xì)菌于37℃過(guò)夜培養(yǎng)。

2. X-Gal、IPTG加到瓊脂平板表面

1）于無(wú)菌超凈工作臺(tái)制備平板（如LB 瓊脂板）；

2）取40 μL 100 mM IPTG和120 μL 20 mg/mL X-gal混合，均勻地涂布于準(zhǔn)備好的平板上；

【注】：平板邊緣較難充分涂布均勻，容易產(chǎn)生假陽(yáng)性，因此，為了得到更好結(jié)果，建議后續(xù)操作中盡可能在平板中間挑取單克隆。

3）37℃ 孵育直至液體被吸收（30 min或更長(zhǎng)）。接種細(xì)菌于37℃過(guò)夜培養(yǎng)。

X-Gal，β-半乳糖苷酶的顯色底物